E.L.I.S.A.- Inmunodoting

      E.L.I.S.A.- Inmunodoting

 Objetivo:

 En esta práctica vamos a detectar la presencia o ausencia de IgGs bovinas en varias muestras problema de suero mediante ensayo de inmunodoting

 Materiales:

-       Placas de análisis

-       Anticuerpos anti-IgG

-       Tampón fosfato

-       Cubeta de incubación

-       Pipeta Pasteur

-       Control + y -

-       Muestra de suero sanguíneo

 Procedimiento:

1.    Primero tenemos que sacar la placa de la bolsa y aplicar 5 μL de la muestra y controles en cada ventana de la placa y dejar que se seque al aire

2.    Luego preparamos la solución de bloqueo, vertiendo el contenido la ovoalbúmina sobre el tampón fosfato salino, lo mezclamos hasta conseguir una mezcla homogénea

3.    Después metemos la placa de microcelulosa en la cubeta y la cubrimos con la disolución de bloqueo y lo dejamos así 30 mins. y tras pasar este tiempo lo tenemos que lavar con abundante agua y evitar que se seque

4.    A continuación, quitamos el agua sobrante y añadimos 20μL del anticuerpo conjugado e incubamos durante 10 mins

5.    Ahora lavamos cada pocillo con mucha agua, sacudimos y la metemos en la cubeta de coloración

6.    Por último añadimos 50 μL  de sustrato cromógeno y le concedemos unos minutos, mientras que lo movemos continuamente. Detenemos la reacción de coloración cuando veamos el control positivo claramente, lavando con abundante agua

Resultado:

 Tras concluir esta práctica podemos ver que en la reacción positiva aparece un punto morado en el centro del pocillo. Si la muestra no tiene IgG bovinas  el anticuerpo no es retenido y no produciría color alguno. Una vez que estan unido el antígeno-anticuerpo, el complejo puede ser detectado por una reacción de oxidorreducción

 Galería: