TSH-ELISA

                    TSH-ELISA

 Objetivo:

 En esta práctica vamos a emplear un test inmunoenzimático para poder determinar y cuantificar las hormonas estimulante del tiroides (TSH)

Materiales:

-       Lector de placas microtitter

-       Agua

-       Pipetas

-       Suero como muestra

Reactivos:

-       Placa de micropocillos cubiertos con Ac monoclonal murino anti- TSH.

-       Set de patrones liofilizados: 0,0,1,0,5,2,5y 10

-       Conjugado enzimático (13mL)

-       Sustrato TMB (11 mL)

-       Solución de parada: HCl 1 N (11 mL)

 Procedimiento:

 1. En primer lugar,pipeteamos 100 μL de los patrones, del control y de la muestra en los pocillos correspondientes

 2. Luego agregamos 100 μL de conjugado en cada pocillo, mezclamos y lo dejamos incubar durante 60 mins

 3. Pasado el tiempo de incubación volcamos el contenido de los pocillos y lavamos los pocillos con agua destilada hasta llenarlos. Repetir el lavado cinco veces

 4. Tras el último lavado, eliminamos el contenido de agua de los pocillos sacudiéndolos contra un papel absorbente

 5. A continuación agregamos 100 μL de solución TMB (sustrato cromogénico).Y vemos que el color vira a azul

 6. Ahora tenemos que Incubar a temperatura ambiente durante 20 minutos

 7. Después, detenemos la reacción añadiendo 100 μL de solución de parada y mezclamos con cuidado durante 30 segundos,podremos apreciar que el color vira completamente a amarillo

8. Por último determinar la absorbancia a 450 nm con un lector de micropocillos durante los 15 minutos siguientes

 Galería: