PCR- turbilátex

 Objetivo:

 En esta práctica vamos a realizar un ensayo turbidimétrico para la cuantificación de proteína C- reactiva (PCR) en suero o plasma humano. Las partículas de látex recubiertas con Ac anti- PCR humana, son aglutinadas por PCR presente en la muestra del paciente. El proceso de aglutinación provoca un cambio de absorbancia proporcional a la concentración de PCR de la muestra, y por comparación con un calibrador de PCR de concentración conocida se puede determinar el contenido de PCR en la muestra ensayada.

MATERIAL:

- Suero como muestra

- Diluyente (R1)

- Látex (R2)

- CRP- CAL

- Micropipetas y puntas de pipeta (500, 200 y 5 microlitros)

- Baño de agua a 37ºC

- Espectrofotómetro ( que lea longitudes de onda de 540nm)

- Cubetas de espectrofotometría

- Tubos de 3 mL

PROCEDIMIENTO:

-1:Primero tenemos que reconstituimos el calibrador con 1 mL de agua destilada, mezclamos con suavidad y dejamos reposar durante 10 minutos.

-2:Después, vamos a calentar los reactivos a 37ºC y programamos el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm y lo ajustamos a 0 con un blanco de agua destilada.

-3: Ahora pipeteamos en dos cubetas distintas ( una correspondiente al patrón y otra a la muestra) las siguientes cantidades:

-4: Por último mezclamos y leemos las absorbancias, primero el patrón ( medimos una vez inmediatamente y otra vez a los 2 minutos de efectuada la mezcla) y a después el mismo proceso con la cubeta de la muestra

Resultado:

 Tras haber realizado todos los procesos anteriores, tenemos que hacer los cálculos estipulados para hallar el resultado de la muestra. Para ello seguimos la siguiente fórmula:

((A1- A2) muestra / (A1- A2) patrón )x concentración del calibrador= mg/ dL PCR

Al poner los datos obtenidos en la práctica nos da:

( 1- 1, 0357)/ (0.82- 0.86) x 64= 56,96 mg/dL PCR.